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详细介绍ATCC细胞的使用方法及注意事项

  ATCC细胞的使用方法:
  1、您收到细胞后,请按照以下方法进行操作:
  取出25cm2培养瓶,75%酒精擦拭培养瓶,放入37℃,5%CO2细胞培养箱中静置4-6小时或隔夜,以稳定细胞状态。然后,用75%酒精擦拭培养瓶,拆下封口膜,收集瓶内液体于50ml离心管中,1000rpm离心5min,弃上清,用6ml完全培养基重悬,全部接种到25cm2培养瓶中,再放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养。如果离心后细胞量很多,可以直接1:2分瓶培养。
  2、细胞传代:细胞生长至覆盖培养瓶的85%及以上面积时,收集瓶内液体于15ml离心管中,1000rpm离5min,弃上清,用12ml完全培养基重悬细胞,按1:2的比例进行接种传代,接种到25cm2培养瓶中,放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养,2-3天更换培养液。换液的步骤同细胞NK-92细胞,ATCC细胞,培养技术传代步骤。
  3、细胞冻存:
  a、细胞生长至覆盖培养瓶的85%及以上面积时,收集瓶内液体于15ml离心管中,1000rpm离心5min,弃上清,用适当量的冻存液(基础培养基:FBS:DMSO=5:4:1)重悬细胞,并放置于冻存管中。
  b、先将细胞冻存管放置于4℃0.5h,再放置于-20℃1.5h,然后将其移入-80℃隔夜,24h后可转入液氮中进行长期保存。
  4、细胞复苏:
  a、从液氮中取出细胞冻存管,快速将其置入37℃水浴中解冻,直至冻存管中无结晶,然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁。
  b、将冻存管中的细胞移至含有5ml完全培养液的15ml离心管中,然后1000rpm/min,离心5min。
  c、弃上清,沉淀细胞用6ml完全培养基重悬,接种到培养瓶中,zui后放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养。
  d、第二天,换用新鲜完全培养基继续培养。
 
  ATCC细胞的注意事项:
  1、培养基于4℃条件下可保存3-6个月。
  2、在细胞培养过程中,请注意保持无菌操作。
  3、传代培养过程中,胰酶消化时间不宜过长,否则会影响细胞贴壁及其生长状态。
  4、如果您的实验时间较长,请在收到细胞后传代时,按细胞量分种2瓶,使用其中的一瓶细胞实验,其余的细胞先冻存起来。下次实验需要时,再复苏。
  5、该ATCC细胞,培养技术只可用于科研。

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